午夜精品白在线观看-日本人妻伦在线中文字幕-国内精品久久毛片一区二区-欧美一性一交一伦一A片视频-cijilu在线视频-老师的丰满大乳奶-亚洲精品久久7777777-车上疯狂做爰HD韩国-丰满少妇猛烈进入A片高潮小说-青草视频在线观看视频-最好看最新高清中文字幕电影-最好看十大无码AV-新超碰97在线观人人澡,在线无码无卡免费播放片,亚洲精品白浆高清久久久久久,亚洲精品久久久中文字幕痴女 ,狠狠干老司机,药娘二区,色伦图片色伦图影院久久,巜中字与上司出轨的人妻,国产精品一线二线三线,久久婷婷日韩一级淫片,欧美色综合网站在线看,玩弄丰满少妇XXXXX性多毛,中文字幕无码日韩专区免费,亚洲国产精品无码久久密柚,婷婷久久无码欧美人妻,日本人强伦姧人妻片,蜜桃臀麻豆精东少妇,精品啪在线观看国产爱臀,国产人妻人伦精品免费看果冻传媒 ,韩国年轻的妈妈,攻把受做哭边走边肉楼梯PLAY,一本色道久久综合一区,中文字幕无码专区精品人妻,亚洲一本在线视频,亚洲精品不卡午夜精品,无码专区人妻系列日韩精品少妇,亚洲乱码视频在线观看,小宝极品内射国产在线,国产亚洲精品久久7777777,狠狠精品干练久久久无码中文字幕,国产无遮挡A片又黄又爽

制備方法：

采用人骨髓來源細胞使用化合物三甲基膽蒽（MCA）誘導產生并篩選出細胞，并使用該細胞在體外合成性雌二醇；所述細胞已由中國典型培養物保藏中心保藏，保藏號CCTCC C2012173；

制備步驟為：

（1）人骨髓來源細胞（HMBDCs，主要成分為人骨髓間充質干細胞）采用現有技術（本實施例采用骨髓沖洗、貼壁法）進行原代培養制備，制備的細胞培養于含15%胎牛血清的DMEM培養基，培養條件為37℃，5%CO2，直至105個細胞/培養瓶；

（2）培養基中加入MCA，使其終濃度為1ug/ml，并每星期更換含MCA的培養基2次；MCA處理1周后結束；細胞在37℃，5%CO2環境中，持續常規培養；

（3）培養至3個月，培養物中可見細胞中出現生殖細胞樣細胞；上述生殖細胞樣細胞表達生殖細胞的標志物：Oct4、Nanos3、c-Kit、DAZL、Vasa；

（4）培養液中檢測到雌二醇的持續表達，與未經誘導處理hBMDCs（E2=65±14.8pmol/L， n=6）相比，MCA誘導后hBMDCs中（E2=3243±947 pmol/L， n=6）雌二醇的濃度高達50倍（p<0.01）差異有顯著性；重新傳代后，觀察到隨著培養時間的延長，雌二醇濃度進行性增加，傳代培養至10天左右達到高峰，高達4500pmol/L，隨后逐步下降，最終維持到較高水平；

（5）體內雌二醇是由卵巢中卵泡合成，在體外培養的誘導后hBMDCs中，觀察到卵泡樣結構的形成（為誘導后hBMDCs中產生雌激素提供細胞支持）；卵母細胞的發育需雌二醇的促進，若缺乏雌二醇，卵母細胞的最大只能長到25微米；而誘導后hBMDCs中的卵母細胞樣細胞體積達到40-50微米；免疫熒光證實上述大細胞為卵母細胞；

（6）卵泡相關基因，包括雌二醇合成的關鍵性基因：STAR、p450arom、p450c17，以及卵泡發育相關基因GDF9在培養物中表達（進一步支持誘導后hBMDCs具有合成雌二醇的能力）；

（7）優化培養條件，增加雌二醇產生的能力，并降低培養液中血清的濃度（有利于雌二醇的進一步分離純化）；上述生殖細胞樣細胞可進一步增大產生早期卵泡樣結構和卵母細胞樣細胞；

（8）按現有方法分離、純化，制得雌二醇。