ELISA Kit通稱為ELISA試劑盒、酶聯免疫吸附檢測試劑盒,可分為定性試劑盒與定量試劑盒。是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。
在生命科學實驗室里,酶聯免疫吸附測定(ELISA) 試劑盒榜上有名。無論是檢測細胞因子、腫瘤標志物,還是進行臨床診斷,ELISA以其高特異性與便捷性,穩坐“定量金標準"的寶座。
ELISA到底是什么?
ELISA的原理其實可以用四個字概括:專一與放大。
它利用抗原-抗體特異性結合的高效性,將目標分子(抗原或抗體)固定在微孔板這樣的固相載體上。隨后,通過連接在抗體上的酶(如辣根過氧化物酶HRP),催化底物(如TMB)發生顯色反應。
簡單來說,哪怕樣本里的目標蛋白濃度極低(低至皮克級,pg/mL),ELISA也能通過這種“化學放大"效應,讓無色底物變成肉眼可見的藍色或黃色,再通過酶標儀進行精準定量。
ELISA的四大“門派"與選擇
ELISA試劑盒根據檢測目標和原理,主要分為以下四種類型。
間接法
原理:
將抗原包被在板上,加入待檢抗體(一抗),再用酶標二抗進行檢測。
適用場景:
抗體檢測的主力軍。
雙抗夾心法
原理:
它使用一對抗體:一個負責捕獲抗原(包被抗體),一個負責檢測抗原(檢測抗體),形成“三明治"結構。
適用場景:
檢測大分子抗原(如細胞因子IL-6、TNF-α),特異性好。
競爭法
原理:
樣本中的抗原越多,與酶標抗原競爭結合抗體的量就越多,最終顯色越淺。即:信號強度與抗原濃度成反比。
適用場景:
主要用于檢測小分子抗原或半抗原(如激素、藥物殘留),這些分子太小,無法同時結合兩個抗體。
直接法
原理:
在所有ELISA類型中操作步驟最少,可以理解為抗原的"直接顯影"
適用場景:
抗體篩選與鑒定,是直接法常見的用途之一。